谷-氨酸脫氫酶(GDH)測試盒_氮代謝系列

谷-氨酸脫氫酶(GDH)測試盒_氮代謝系列

測定方法：分光光度法

產品規格：50管/48樣

注    意： 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：                           

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷-氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷-氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。

測定原理：

GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷-氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通過測定340nm吸光度的下降速率，計算GDH活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；

谷-氨酸脫氫酶(GDH)測試盒_氮代謝系列

粗酶液提取：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定

（1）在試劑二中加入25mL試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現配現用（配好后12h內用完）；

（2）取0.05mL樣本和0.95mL工作液于1mL比色皿中，混勻，加工作液的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。