NADH-谷氨-酸合成酶NADH-GOGAT測試盒氮代謝

NADH-谷氨-酸合成酶NADH-GOGAT測試盒氮代謝

測定方法：分光光度法

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

注    意： 正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：                           

GOGAT分布于植物中，和谷氨-酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。

測定原理：

GOGAT催化谷氨-酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成兩分子的谷-氨酸；同時NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

NADH-谷氨-酸合成酶NADH-GOGAT測試盒氮代謝

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

（1）工作液的配制：在試劑二中加入25mL試劑一充分溶解混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用（配好后3h內(nèi)用完）；

（2）取0.1mL樣本和0.9mL工作液于1mL比色皿中，混勻，加工作液的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。