硝酸還原酶NR測試盒NADH速率法_氮代謝系列

硝酸還原酶NR測試盒NADH速率法_氮代謝系列

測定方法：分光光度法

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

注　意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

硝酸還原酶NR測試盒NADH速率法_氮代謝系列

測定意義：

NR（ EC 1.7.1.3）廣泛存在于植物中，是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶，也是誘導(dǎo)酶，對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。

測定原理：

NR 催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；NADH 在 340 nm 有大吸收峰，通過測定 NADH 減少速率來表示 NR 活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

誘導(dǎo)劑儲備液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 20mL×1 瓶，-20℃保存。

試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加 4mL 提取液溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

誘導(dǎo)劑應(yīng)用液的配制：用時將誘導(dǎo)劑儲備液稀釋 10 倍，即取 10mL 誘導(dǎo)劑儲備液加 90mL

蒸餾水，充分混勻。

動植物組織樣品的前處理：

（1）取適量誘導(dǎo)劑于燒杯中，將新鮮標(biāo)本洗凈，濾紙吸干，放入誘導(dǎo)劑應(yīng)用液中（淹沒即可），浸泡 2h，取出樣本，濾紙吸干。

（2）按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

注意：

1、 建議使用新鮮沒有冷凍過的樣本。

2、 一般不要誘導(dǎo)處理，預(yù)測定結(jié)果沒有活性（ΔA≤0）則需要誘導(dǎo)處理。

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。