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內脂素(VF)酶聯免疫吸附測定試劑盒

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更新時間2023/8/1 20:28:56
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保存條件：2-8℃冷藏數量：666保質期：6適應物種：多物種用途范圍：科研實驗產地：上海品牌：科翰盛規格：48T96T樣本：血清

內脂素(VF)酶聯免疫吸附測定試劑盒產品信息

保存條件： 2-8℃冷藏

數量： 666

保質期： 6

適應物種： 多物種

用途范圍： 科研實驗

產地：上海

品牌： 科翰盛

規格： 48T 96T

樣本： 血清,血漿,尿液,組織等

檢測方法： 酶聯免疫

應用：科研

貨號： KHSJ18149

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗 (ELISA) 。往預先包被植物果糖內脂素(VF)酶聯免疫吸附測定試劑盒抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內脂素(VF)酶聯免疫吸附測定試劑盒呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度 (OD 值) ,計算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法

1. 樣本不能含疊氮鈉 (NaN3) ,因為疊氮鈉 (NaN3) 是辣根化物酶 (HRP) 的劑。

2. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。

3. 植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。

4. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存

于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀 (450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1. 試劑盒保存在 2-8℃ ,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封 (低溫干燥) 保存。

3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍,最終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱	96 孔配置	48 孔配置	備注
微孔酶標板	12 孔×8 條	12 孔×4 條	無
標準品	0.3mL*6 管	0.3mL*6 管	無
樣本稀釋液	6mL	3mL	無
檢測抗體-HRP	10mL	5mL	無
20×洗滌緩沖液	25mL	15mL	按說明書進行稀釋
底物 A	6mL	3mL	無
底物 B	6mL	3mL	無
終止液	6mL	3mL	無
封板膜	2 張	2 張	無
說明書	1 份	1 份	無
自封袋	1 個	1 個	無

注:標準品 (S0-S5) 濃度依次為:0,20,40,80,160,320 U/mL

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。

2. 自動洗板機:每孔注入洗液 350 μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50 μ L;

3. 樣本孔先加待測樣本 10 μL,再加 40 μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶 (HRP) 標記的檢測抗體 100 μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板 5 次 (也可用洗板機洗板) 。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50 μL,37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50 μL,15min 內,在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

結果判斷

繪制標準曲線:在 Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應 OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

試劑盒性能

1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值,大于等于

0.9900。

2. 靈敏度:檢測濃度小于 0.1 U/mL。

3. 特:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重復性:板內、板間變異系數均小于 15%。

5. 貯藏:2-8℃ ,避光防潮保存。

關鍵詞：酶標儀恒溫箱洗板機水浴鍋

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