SMD1163酵母菌

SMD1163酵母菌

X-33是畢赤酵母菌株，屬于真核細(xì)胞。具有氨芐和卡納抗性。質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的條件為電轉(zhuǎn)化，應(yīng)用于蛋白表達(dá)。適宜生長溫度是28至30度，溫度超過32度對蛋白的表達(dá)是有害的，并可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。可生長在YPD培養(yǎng)基中。用來表達(dá)含有Zeocin抗性的載體重組質(zhì)粒。含有AOX1基因，產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化株是Mut+基因型。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表：

Rosetta (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

Rosetta (DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞

Rosetta-gami (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

Rosetta-gami (DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞

Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

Tuner(DE3)  plysS 感受態(tài)細(xì)胞

DNA快速連接試劑盒

DNA快速連接試劑盒

一站式TA克隆試劑盒

一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài))

一站式平末端克隆試劑盒

小RNA克隆試劑盒

通用 miRNA 克隆接頭

克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液

菌落PCR試劑盒2.0

IPTG干粉

IPTG溶液

X-Gal干粉

X-Gal溶液，20mg/mL

免質(zhì)粒提取篩選試劑盒

超級培養(yǎng)基

干粉型LB培養(yǎng)基

干粉型LB-Lennox培養(yǎng)基

干粉型2×YT培養(yǎng)基

干粉型SB培養(yǎng)基