Anti-DNA-PKcs抗體

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【產品名稱】：Anti-DNA-PKcs抗體
【規 格】：0.1ml/0.2ml
【相關標記】：Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 647 AP APC Biotin Cy3 Cy5 Cy5.5 Cy7 FITC Gold HRP PE PE-Cy3 PE-CY5 PE-CY5.5 PE-CY7 RBITC
【濃 度】：1mg/1ml
【抗體來源】：Rabbit or Mouse or Goat
【克隆類型】：polyclonal or monoclonal
【產品類型】：一抗
【性 狀】：Lyophilized or Liquid
【亞 型】：IgG
【純化方法】：affinity purified by Protein A
【保存條件】：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
連續使用時4°C存儲，保質期六個月,*存儲時建議分裝為10ul以上小包裝-20°C存儲，并避免反復凍融，保質期一年。
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免疫熒光技術的實驗步驟

1. 直接免疫熒光法測抗原
⑴基本原理
將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。
⑵試劑與儀器磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4熒光標記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進行稀釋緩沖甘油：分析純無熒光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制搪瓷桶三只（內有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）有蓋搪瓷盒一只（內鋪一層浸濕的紗布墊）熒光顯微鏡玻片架濾紙37℃溫箱等。
⑶實驗步驟
① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，10min后棄去，使標本保持一定濕度。
② 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其*覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時間（參考：30min）。
③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不時振蕩。
④ 取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度，一般可用“+”表示：
（-）無熒光；（±）極弱的可疑熒光；（+）熒光較弱，但清楚可見；（++）熒光明亮；（+++ --++++）熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++”以上，而各種對照顯示為（±）或（-），即可判定為陽性。
⑷注意事項
1）對熒光標記的抗體的稀釋，要保證抗體的蛋白有一定的濃度，一般稀釋度不應超過1：20，抗體濃度過低，會導致產生的熒光過弱，影響結果的觀察。
2）染色的溫度和時間需要根據各種不同的標本及抗原而變化，染色時間可以從10 min到數小時，一般30 min已足夠。染色溫度多采用室溫（25℃左右），高于37℃可加強染色效果，但對不耐熱的抗原（如流行性乙型腦炎病毒）可采用0-2℃的低溫，延長染色時間。低溫染色較37℃30 min效果好的多。
3）為了保證熒光染色的正確性，*試驗時需設置下述對照，以排除某些非特異性熒光染色的干擾。
① 標本自發熒光對照：標本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。
② 特異性對照（抑制試驗）：標本加未標記的特異性抗體，再加熒光標記的特異性抗體。
③ 陽性對照：已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。
如果標本自發熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光，陽性對照和待檢標本呈強熒光，則為特異性陽性染色。
4）一般標本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現象，經熒光染色的標本在當天觀察，隨著時間的延長，熒光強度會逐漸下降。
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